洋葱亚细胞定位 思特进

植物中，WRKY转录因子家族成员众多，近年来成为植物分子生物学研究的热点。由于其编码蛋白的N-端具有高度保守的WRKYGQK氨基酸残基序列，人们将其命名为WRKY。其保守的WRKY结构域能与下游基因启动子W-box特异性结合，从而调控下游基因的表达水平。目前，诸多研究结果表明，WRKY转录因子在植物中参与生物胁迫、非生物胁迫、种子发育、种子休眠与萌芽、形态建成、衰老等方面的表达调控。前人研究表明，拟南芥转录因子AtWRKY70的表达水平受水杨酸诱导，与该信号途径当中的抗病反应相关联。与野生型相比，超量表达AtWRKY70的拟南芥植株对青花菜褐茎病(Hyaloperonosporaparasitica)、假单胞菌(Pseudomonassyringae)等真菌病表现出了更强的抗性，而对欧文氏软腐菌(Erwiniaamylovora)等细菌病则更敏感。发现，AtWRKY70对植物的衰老起负调控作用。序列对比分析表明，在杨树当中，PtWRKY89与AtWRKY70高度同源，对于PtWRKY89生物学功能的研究至今尚未报道。本中，我们了PtWRKY89基因，并对其进行了组织表达分析及亚细胞定位，构建载体转化毛白杨，在转基因植株中分析了该转录因子在病害胁迫生理过程中的调控作用。

选取含有氯嘧磺隆抗性标记的ILV1基因和报告基因GFP二元载体的农AGL-1，采用单因子和双因子方法研究根癌农AGL-1介导柱花草菌CH008转化过程中各主要因素对转化率的影响，优化构建ATMT转化柱花草胶孢菌体系条件，使转化效率达到300～400个转化子/106个孢子，即根癌农AGL-1浓度OD600=0.8，菌分生孢子浓度为1×106个/mL，AS浓度为100μmol/L，诱导时间为6 h，共培养温度和时间分别为25 ℃和4d。经PCR检测都有GFP片段，并能够表达绿色荧光蛋白。这为开展菌对柱花草的致病机理研究提供了依据，优化转化体系有利于后续突变体库的扩大、筛选突变体和致病功能基因的研究。

F-box蛋白通过在UPP(泛素-蛋白酶体途径)中特异识别底物蛋白而参与细胞周期调控、转录调控、细胞凋亡、信号转导等生命活动。很多研究结果表明F-box蛋白通过SCF复合体调节多种的信号转导途径，如IAA、JA、GA和乙烯的信号传导，并且与植物对非生物胁迫的响应有很大的关系。故其对植物抗逆性研究有重要意义。鹰嘴豆是三大豆类作物，主要生长在干旱和半干旱地区。它具有生育期短，基因组小的特点。经过长时间的进化和对不良环境的适应，鹰嘴豆具有了丰富的耐旱、耐低温和耐盐碱等抗逆基因，具有其自身的优势来研究植物的抗逆机制。目前，洋葱亚细胞定位，鹰嘴豆在分子生物学方面的研究较为少。本研究从EST库中挑选到两个F-box蛋白基因在干旱胁迫下高效表达，采用RACE技术其全长，并对目的基因进行了初步的生物信息学分析和转录水平的表达谱分析，旨在为揭示鹰嘴豆F-box蛋白在植物的生长发育及在逆境信号传导中的作用奠定理论基础。CarF-box1基因的开放阅读框(ORF)长1093bp，编码一条345个氨基酸残基的多肽，含有F-box结构域和Kelch结构域。其理论等电点为5.38，分子量为38.37kDa。CarF-box1基因不含有内含子。荧光定量PCR分析表明，CarF-box1在鹰嘴豆的根、茎、叶、花、成熟豆和成熟荚中均有表达，在花中表达极高。